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人白细胞介素10(IL-10)ELISA试剂盒的原理和操作方法-睿创生物

2023-12-18 [333]

人白细胞介素10(IL-10)ELISA试剂盒的原理和操作方法

检测原理:

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素10(IL-10)水平。用纯化的人白细胞介素10(IL-10)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人白细胞介素10(IL-10),再与HRP标记的人白细胞介素10(IL-10)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过che底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人白细胞介素10(IL-10)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人白细胞介素10(IL-10)浓度。

操作步骤:


1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   

4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

8.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10-20分钟。

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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