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ELISA实验各种样本收集及处理方法

2023-12-15 [257]

ELISA实验各种样本收集及处理方法:由于ELISA实验只能检测可溶性蛋白质的含量,因此要求样本应清晰透明并离心除去沉淀物或悬浮物质。为确保实验的准确性, -20℃或-80℃保存的样本应在1-6个月内完成检测,4℃保存的样本在一周内完成检测。此外,样本中不能含有会抑制HRP活性的NaN3,否则会造成假阴性结果。可用于ELISA实验的样本一般有血清、血浆、尿液、细胞培养上清以及组织匀浆等。不同样本类型的预处理方法也不同。适当的样本预处理是确保ELISA实验正确性和准确性的第一步。这里,睿创生物将介绍以下几种不同样本类型的处理方法。

血清

血清是ELISA实验常用的样本,其预处理也十分简单。使用无热原无内毒素的试管或离心管采集血液样本,将试管或离心管在室内温度下放置自然凝固(视室温环境10分钟到2小时不等)或4℃过夜,分离出血清,(建议倾斜试管或离心管以扩大液面的横截面,使血清能更大程度的分离出来,),2-8℃条件离心5分钟左右(5000-6000转/分钟),仔细收集上清,立即进行测定,建议在-20℃或-80℃下将收集的血清分装保存,避免反复冻融,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

注意事项:

在收集血液样本的过程中应避免溶血,因为红细胞在溶解时会释放具有过氧化物酶活性的物质,这种情况下,ELISA实验中将会出现非特异性显色反应,导致检测结果不准确,出现假阳性结果。另外,样本还应避免细菌污染,因为细菌可能含有内源性HRP,也会导致检测结果不准确。

血浆

应根据标本的要求选择EDTA、肝素钠、枸橼酸纳或柠檬酸钠作为抗凝剂,使用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液样本,采集后30分钟内,混合10-20分钟后,2-8℃条件离心5分钟左右(5000-6000转/分钟),仔细收集上清液(血浆),建议在-20℃或-80℃下将收集的血清分装保存,避免反复冻融。样本应避免溶血或高血脂。保存过程中如有沉淀形成,使用前应该再次离心。

注意事项:

检测前请仔细阅读ELISA试剂盒说明书,查看该试剂盒针对抗凝剂是否有特殊要求。

尿液

用无菌管收集,2-8℃条件离心5分钟左右(5000-6000转/分钟)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

细胞培养上清

检测分泌性的成份时,用无菌管收集。将细胞培养上清液吸入离心管中并以2-8℃条件离心5分钟左右(5000-6000转/分钟),除去细胞碎片和杂质,收集上清液备用,样本保存在-20℃或-80℃,避免反复冻融,保存过程中如有沉淀形成,使用前应再次离心。

脑脊液

用无菌管收集,2-8℃条件离心5分钟左右(5000-6000转/分钟),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,使用前应再次离心。(采集大鼠脑脊液)的方法:采集脑脊液时,用湿纱布擦试大鼠颈背部皮肤,剪去背毛暴露皮肤。两耳连线剪一横切口(1. 5cm左右),在其中点向尾侧沿皮下剪开2cm,将皮分离两侧,扩大视野。紧贴大鼠头骨依次逐层剪切各肌层,并断端依次拉向尾侧扩大视野。注意,有出血时用干纱布按压止血,保持术口清晰。接近颈后黄韧带时,小心地用7号注射针头分离覆盖的肌肉,暴露寰枕膜。用1ml注射器(针头用止血钳使针尖与针体成150度钝角),针斜面向上,针尖duan近水平刺入蛛网膜下腔,固定针体,缓慢抽取脑脊液,一般采集量为100-200微升。)

唾液

用无菌管收集,2-8℃条件离心5分钟左右(5000-6000转/分钟),仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,使用前应再次离心。


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