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小鼠细胞周期相关因子p16(p16)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书
2023/9/24 [536]
小鼠细胞周期相关因子p16(p16)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:
96T
1ng/L -50 ng/L
使用目的:
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中细胞周期相关因子 p16(p16)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠细胞周期相关因子 p16(p16)水平。用纯化的小鼠细胞周期相关因子 p16(p16)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入细胞周期相关因子 p16(p16),再与 HRP 标记的细胞周期相关因子 p16(p16)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻-底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的细胞周期相关因子 p16(p16)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中小鼠细胞周期相关因子 p16(p16)浓度。
试剂盒组成
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标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
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2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3
8. 洗涤:操作同 5
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白孔调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结:

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计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 1 小时后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 大于标准品孔第一孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月
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