首页 > 资料下载 > 苯并芘(BaP)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书
苯并芘(BaP)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书
2023/4/23 [345]

苯并芘(BaP)酶联免疫分析(ELISA试剂

使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

1 使用目的:

本试剂盒用于奶油,鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿样,植物油中苯并芘(BaP)残留的定量检测

2 实验原理

本试剂盒采用竞争ELISA方法,在微孔板包被有苯并芘(BaP偶联抗原,加入苯并芘(BaP标准品或样品,游离苯并芘(BaP与微孔条上预包被的苯并芘(BaP偶联抗原互相竞争抗苯并芘(BaP抗体酶标记物,用TMB底物显色,加入终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在450nm波长下进行检测,吸光值与样品中苯并芘(BaP含量成反比,通过标准曲线计算样品苯并芘(BaP的含量。  

3 试剂盒组成

1. 预包被的苯并芘(BaP偶联抗原的可拆酶标板:1块(12×8条)。
2.苯并芘(BaP标准品:6瓶(1ml/瓶),含量分别是: 0 ppb0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1 ppb
3.抗苯并芘(BaP抗体酶结合物:1瓶(6ml)。
4.显色液A1瓶(6ml)。
5.显色液B1瓶(6ml)。
6.终止液:1瓶(6ml),2M硫酸。
7.样本稀释液:1瓶(10×,  6ml),用于样品稀释用。
8.浓缩洗涤液:1瓶(220ml),用于洗板。
9.说明书一份。

4 需要而未提供的材料
1.设备
2.波长450nm酶标仪。
3.粉碎机。
4.量筒。
5.振荡器。
6.漏斗。
7.Whatman No 1或相当的滤纸。
8.微量移液器。
9.试剂
10.去离子水或蒸馏水。
11.甲醇。
5 贮存
试剂盒贮存于2~8,切勿冷冻 未用完的微孔板应该密封干燥保存
6 注意事项
1.使用试剂盒前请仔细阅读说明书。

2.不要使用过期试剂盒。
3.试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(25±2),建议至少回温2小时。
4.标准品中含有苯并芘(BaP),使用时应特别注意,操作时应带手套。
5.终止液中含有硫酸,使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6.不同标准品、样品所用吸头不能混用,否则会影响试验结果。
7.不同批号试剂盒中的试剂不得混用;不同标准品、样品所用吸头不得混用,否则会影响实验结果。
8.稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液,否则会影响实验结果
9.混合试剂时应避免起泡。
7 工作液准备
1.苯并芘(BaP)标准品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3 ppb,0.9ppb,2.7 ppb,8.1ppb
2.浓缩洗涤液:用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用

3.样本稀释液:用蒸馏水按1:10(1+9)稀释备用
4.显色剂:已备用,避免光线直照
5.反应终止液:已备用
8 样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)
1.取10g粉碎的样品,加 20ml 70%甲醇溶液
2.强力振荡3分钟
3.用Whatman No 1滤纸过滤
4.取25µl处理后的样品,加入25µl样本稀释液于反应孔中(样本稀释倍数为2
9 酶免分析步骤
1. 实验须知
2.实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温(25±2),时间约2小时。回温至室温(25±2)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8干燥保存
注:一定保证回温充分,否则影响检测的精确度和准确度。
3.使用后请立即将试剂放回2~8保存
4.请不要改变分析程序
5.请使用精确的微量移液器
6.操作一旦开始,请不要中断任何程序
7.ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作
8.为避免交叉污染,每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
9.加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
分析步骤
1.预先进行编号,标记B0、标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测
2.取所需数量的微孔(微孔条可拆),将多余板条重新密封并立即放回2~8保存
3.样品稀释液(10×)、浓缩洗涤液(2)稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)
4.B0孔中加入50µl  0.0 ppb标准品溶液
5.在各标准孔中加入50μl的标准品溶液
6.在各样品孔中加入50µl样品溶液
7.在所有孔中加入50µl的抗苯并芘(BaP)抗体酶结合物
8.轻轻晃动反应板几秒钟。
9.37温浴30min (温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差)
10.甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,最后一次应在吸水纸上拍打以完-全除去孔中液体。

11.反应
12.洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A,再加 50µl显色液B;轻微晃动反应板使之彻-底混匀
13.37温浴10min
14.每孔中加入50µl终止液,混匀
15.450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。
10 结果计算
1.定量分析
2.所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以第一个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
B0—0ppb标准溶液的平均吸光度值
3.以苯并芘(BaP)浓度的对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为苯并芘(BaP)浓度的对数值,求得反对数即为测定液中苯并芘(BaP)浓度Cppb
4.由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。
5.半定量测定
6.目测半定量测定: 首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品颜色深浅比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。
7.仪器半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品吸光度值的高低比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

11 特异性
物质 交叉反应 苯并芘(BaP100%
12 试剂盒参数
本试剂盒检测下限为0.05ppb
B0吸光度最佳值应大于1.0
试剂盒吸光度板内误差小于8%,板间误差小于15%。
用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80%。
试剂盒提供的标准曲线范围为0.1ppb~8.1ppb
14 分析限制
本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLCGC/MS加以确证。


文件下载    图片下载    

津公网安备 12010302002413号