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ELISA常见问题解答

2024-04-18 [168]

 以下是ELISA实验过程中遇到的问题解答,更多实验资讯可咨询我司业务员。天津睿创生物科技有限公司拥有自己的实验室,备有专业的技术研发团队,长期致力于各种生物试剂,细胞,血清,ELISA试剂盒的研发与销售,实验提供免费代测服务,质量问题包退换,并提供技术服务,如果您有实验上的问题欢迎前来咨询,为您提供专业的一对一技术指导。


1、试剂盒从冰箱拿出后未充分平衡室温,会有什么影响?


如果试剂盒从冰箱中拿出后未充分平衡至室温(20~25℃),可能会导致温育时间不够,从而使OD值偏低。


2.、移液器吸液量不足或吸头内壁不清洁,会造成什么后果?


移液器吸液量不足或吸头内壁不清洁,都可能导致加样量不足,造成OD值偏低。此外,吸头内壁不清洁还可能导致非特异性吸附,进一步影响实验结果。


3、操作顺序颠倒或遗漏步骤,会有什么后果?


如果操作顺序颠倒或遗漏步骤,很可能导致实验失败,例如漏加酶结合物、显色剂等,使整块ELISA板都不显色。


4、温育时间不够或温育温度未达到要求,会有什么影响?


温育时间不够或温育温度未达到要求,都会影响反应的进行,导致OD值偏低。例如,保温用的湿盒没有预温,或培养箱温度不符合操作要求等。


5、洗板液在配置过程中出现问题,会造成什么后果?


洗板液在配置过程中出现问题,如量筒不干净、含有酶抑制物、浓度过高等,都可能导致洗去特异性结合物,使OD值偏低。


6、洗板时冲击力太大、浸泡时间过长、洗板次数过多,会有什么影响?


这些操作都可能导致洗去结合在包被板的特异性结合物,从而使OD值偏低。


7、加完终止液后没有轻轻充分混匀ELISA板液就立即读数或放置太久才进行读数,会有什么影响?


这可能导致检测OD值偏低或偏高。一般建议在加完终止液后3分钟之内进行读数。


8、酶标仪检测波长设定有误,会有什么后果?


如果酶标仪检测波长设定有误,例如选用的波长不是产物的敏感吸收峰,可能会导致OD值偏低或偏高。


9、阴性对照出现阳性结果,可能的原因是什么?


阴性对照出现阳性结果可能是由于样品、试剂被污染,或加样时操作不当导致相邻孔之间溶液溅洒出现交叉污染。此外,抗体量过多导致非特异性结合也可能是一个原因。


10、酶标板整体背景高,可能的原因是什么?


酶标板整体背景高可能是由于底物孵育过程没有避光,导致背景信号增强。


11、复孔之间重复性差,可能的原因是什么?


复孔之间重复性差可能是由于加样本及试剂量不准、孔间不一致等原因造成的。此外,操作条件、人员等的不一致也可能导致重复性差。


12、阳性对照值偏低或低吸光度,可能的原因是什么?


阳性对照值偏低或低吸光度可能是由于温育的时间或温度不够、显色反应时间太短、显色液变质或试剂过期、试剂稀释有误等原因造成的。


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